過氧化氫酶(CAT)活性檢測(cè)試劑盒

貨號(hào): H0090
規(guī)格: 50T/48S

過氧化氫酶(CAT)活性檢測(cè)試劑盒方法：紫外分光光度法

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體100μL×3瓶，4℃保存。

產(chǎn)品說明：

CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是最主要的 H₂O₂ 清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。

H₂O₂在240nm下有特征吸收峰，CAT能夠分解H₂O₂，使反應(yīng)溶液240nm下的吸光度隨反應(yīng)時(shí)間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出CAT 活性。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

過氧化氫酶(CAT)活性檢測(cè)試劑盒操作步驟：

一、粗酶液提�。�

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為500-1000:1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20%或 200w，超聲3秒，間隔10秒。重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（ml）為 1：5-10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
二、CAT 測(cè)定操作

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至240nm處，蒸餾水調(diào)零。

2、 CAT檢測(cè)工作液的配置：用時(shí)在每瓶試劑二（100μL）中加入20ml試劑一，充分混勻，作為工作液；用不完的試劑4℃保存一周。

3、 測(cè)定前將CAT檢測(cè)工作液 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其他物種）水浴10min。

4、 取 1mL CAT 檢測(cè)工作液于1mL石英比色皿中，再加入35μL樣本，混勻 5s；室溫下立即測(cè)定 240nm

下的初始吸光值 A1和1min后的吸光值 A2。計(jì)算ΔA=A1-A2

三、過氧化氫酶(CAT)活性檢測(cè)試劑盒活性計(jì)算：

1、 血清（漿）CAT活力的計(jì)算：

單位的定義：每毫升血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化1nmol H₂O₂ 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT（U/mL）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹﹞÷V 樣÷T=678×ΔA

2、 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計(jì)算：

a. 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化1nmol H₂O₂ 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT（U/mg prot）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹﹞÷（V樣×Cpr）÷T=678×ΔA÷Cpr

b. 按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化1nmol H₂O₂ 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT（U/g鮮重）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹﹞÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T=678×ΔA÷W

3、 按細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計(jì)算：

單位的定義：每 1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每分鐘反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H₂O₂ 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT（U/10⁴cell）＝﹝ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹﹞÷（500×V 樣÷V樣總）÷T=1.356×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.035×10^-3L；ε: H₂O₂ 摩爾吸光系數(shù)，4.36×10⁴L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.035ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1min。W，樣本質(zhì)量，g；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬

原創(chuàng)作者：青島捷世康生物科技有限公司

標(biāo)簽：過氧化氫酶(CAT)活性檢測(cè)試劑盒 過氧化氫酶檢測(cè)試劑盒 CAT活性檢測(cè)試劑盒 CAT檢測(cè)試劑盒 

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