蔗糖合成酶（Sucrose synthase，SS）試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
測(cè)定意義
蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫”器官運(yùn)輸?shù)闹饕螒B(tài)。SS（EC 2.4.1.13）催化植物體內(nèi)游離果糖和葡萄糖合成蔗糖。
測(cè)定原理
SS 催化游離果糖與葡萄糖供體 UDPG 反應(yīng)生成蔗糖，蔗糖與間苯二酚反應(yīng)可呈現(xiàn)顏色變化，在 480nm 下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；試劑一：液體 10mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃保存試劑四：液體 40mL×1 瓶，4℃保存；試劑五：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；
樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟
| | | 試劑名稱（μL） | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
| | | | | | | |
| | | 試劑一 | 150 | | 150 |
| | | | | | | |
| | | 樣本 | 30 | | |
| | | | | | | |
| | | 試劑二 | | | 30 |
| | | | | | | |
| | | | | 混勻，25℃準(zhǔn)確水浴 10min | |
| | | | | | | |
| | | 試劑三 | | 50 | | 50 |
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| | | 沸水浴中煮沸 10min 左右（蓋緊，以防止水分散失），冷卻 |
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| | | 試劑四 | | 700 | | 700 |
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| | | 試劑五 | | 200 | | 200 |
混勻，80℃水浴保溫 10min，冷卻后，以蒸餾水調(diào)零，480nm 下測(cè)定各管吸光值。
SS 活性計(jì)算
1、按照蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。
SS 活性(U/mg prot)=(C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1×A 測(cè)定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管)÷(V1×Cpr)÷T=100×A 測(cè)定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr
2、按照樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。
SS 活性(U/g 鮮重) = (C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1×A 測(cè)定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×A 測(cè)定管÷A
標(biāo)準(zhǔn)管÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，1000μg/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.03mL； V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；T ：反應(yīng)時(shí)間：10min。
技術(shù)支持: