哪些因素可影響細(xì)菌革蘭氏染色反應(yīng)的結(jié)果

 哪些因素可影響細(xì)菌革蘭氏染色反應(yīng)的結(jié)果

革蘭氏染色法的原理至今還不完全清楚，解釋不一。其染色結(jié)果受多方面因素影響，主要與被檢細(xì)菌本身特性、培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件、菌齡、菌細(xì)胞壁完整性和染色時(shí)的操作技術(shù)有關(guān)。分述如下：

一、細(xì)菌本身特征：如葡萄球菌、梭狀芽孢桿菌因易脫色，常偏紅或呈陰性：白喉?xiàng)U菌和結(jié)核桿菌染色反應(yīng)亦介于陽(yáng)性和陰性之間，稱弱陽(yáng)性，成淡紫紅色。

二、培養(yǎng)基成分：革蘭氏言行菌含有多量的核糖核酸鎂鹽，與進(jìn)入菌體內(nèi)的結(jié)晶紫和碘液結(jié)合成大分子的復(fù)合物，不易脫出，故革蘭氏言行菌攝取結(jié)晶紫多且牢固，呈紫色。革蘭氏陰性菌含核糖核酸鎂鹽甚少，故依托色，成負(fù)染劑顏色-紅色。在缺乏鎂鹽的培養(yǎng)基中的培養(yǎng)的革蘭氏陽(yáng)性菌可成為革蘭氏陰性。

如培養(yǎng)基中計(jì)入青霉素，因其干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，亦可成陰性

三、培養(yǎng)條件：在培養(yǎng)基PH不適宜時(shí)，細(xì)菌電荷改變，染色的結(jié)果也發(fā)生改變。因革蘭氏陽(yáng)性菌的等電點(diǎn)（ph2-3）比革蘭氏陰性菌的等電點(diǎn)（ph4-5）低，在一般PH為7.2-7.6的培養(yǎng)基中陽(yáng)性菌所帶負(fù)電荷較陰性菌多，因此，容易和帶正電荷的堿性燃料結(jié)合，不易脫色。否則，如培養(yǎng)基PH降低，使陽(yáng)性菌可變?yōu)殛?yáng)性。但事實(shí)上影響不大，因PH過(guò)高或過(guò)低一般細(xì)菌均不能生長(zhǎng)繁殖。

四、菌齡：菌齡能影響染色結(jié)果。陽(yáng)性菌含核算兩較多，所以一結(jié)合染料，呈陽(yáng)性；若革蘭氏陽(yáng)性菌的核算減少，可能變?yōu)殛幮�。陳舊培養(yǎng)物因核酸含量降低，故革蘭氏陽(yáng)性菌，往往染色呈陰性。

五、菌細(xì)胞壁的完整性：革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁破損或缺乏者（如L型菌）也呈陰性反應(yīng)。因革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁致密，含粘肽（即肽聚糖）多，在95%酒精中導(dǎo)致細(xì)胞壁脫水，通透性下降不易脫色；如胞壁破損或缺乏，則進(jìn)入菌細(xì)胞而脫色。膿細(xì)胞中的革蘭氏陽(yáng)性菌，因被吞噬變?yōu)殛幮浴?/span>

六、操作技術(shù)：涂片太厚，細(xì)菌重迭，究竟脫色不均勻，其中部分革蘭氏陰性菌可呈紫色。如究竟脫色時(shí)間太長(zhǎng)；或第一步染色沖洗后，片子上殘留水分過(guò)多使酒精時(shí)間太長(zhǎng)；或第一步染色沖洗后，騙子上殘留水分過(guò)多使酒精濃度減低，將會(huì)增強(qiáng)脫色力，使革蘭氏言行菌顯陰性反應(yīng)。因75%酒精的脫色力較95%酒精的強(qiáng)。轉(zhuǎn)染試劑

    此外，染色液貯存過(guò)久，以及其他各個(gè)染色步驟的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或不夠，也都會(huì)有性腺染色反應(yīng)的結(jié)果。如初染液配制過(guò)久，因水分蒸發(fā)而染料濃度提高，易使陰性菌呈陽(yáng)性反應(yīng)；碘液放置過(guò)久，碘揮發(fā)，媒染作用不好，則陰性菌呈陰性反應(yīng)；又如結(jié)晶紫染色過(guò)長(zhǎng)或脫色時(shí)間太短，均可使陰性變?yōu)殛?yáng)性。
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