食源性致病菌ELISA檢測(cè)

 食源性致病菌ELISA檢測(cè)

世界衛(wèi)生組織將食源性疾病定義為“凡是通過攝氏而進(jìn)入人體的病原體，使人體患感染性或中毒性疾病，統(tǒng)稱為食源性疾病”。導(dǎo)致這類疾病的微生物叫食源性致病菌。隨著人們居住和衛(wèi)生條件的不斷改善，以及抗生素的康永，人類對(duì)病菌的抵抗能力卻在不斷下降，食源性疾病一直呈上升的趨勢(shì)。因此，對(duì)視頻中致病菌的檢測(cè)和檢驗(yàn)也就越來越現(xiàn)實(shí)其重要性，常規(guī)的檢驗(yàn)大多依靠培養(yǎng)目標(biāo)微生物的方法來確定視頻是否收到此微生物的污染，這些方法需要一定的培養(yǎng)時(shí)間，少則2-3天，多至數(shù)周，才能確定。而現(xiàn)行有效的一些快速檢測(cè)方法不僅可以大大縮短檢測(cè)時(shí)間，提高微生物檢出率，做到快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確。免疫測(cè)定法，就因其準(zhǔn)確性、特異性、使用范圍寬，檢測(cè)熟讀快及費(fèi)用低的特點(diǎn)，成為檢驗(yàn)中廣泛應(yīng)用的方法之一。

沙門氏菌是引起食物中毒的中藥病原菌。在世界各國的各類細(xì)菌性食物中毒中，沙門氏菌引起的食物中毒常列榜首。在英國，就以沙門氏菌占首位，美國則為第二位僅次于金黃色葡萄球菌，日本則以溶血性弧菌和金黃色葡萄球菌為最多，沙門氏菌占第三位。我國內(nèi)陸地區(qū)也是以沙門氏菌為首位，世界上最大的儀器沙門氏菌食物中毒是1953年瑞典由吃豬肉而引起的鼠傷寒沙門氏菌中毒，7717人中毒，90人死亡。

沙門氏菌廣泛分布于自然界中，而且種類多，至今已有2000種以上，的許晴型被發(fā)現(xiàn)。因此食物受到沙門氏菌污染的機(jī)會(huì)很多，易受污染的食品種類也很多，包括生畜、禽、蛋、奶、魚、蝦、貝類制品等。另外，在耨寫環(huán)境條件下豆制品、水、糕點(diǎn)、以及食品加工攝氏表面也可檢出，所以沙門氏菌日益引起人們的高度重視，視頻中的沙門氏菌的檢驗(yàn)也顯得非常重要，沙門氏菌的檢測(cè)方法也是世界各國研究最多的，因此沙門氏菌的檢測(cè)方法相對(duì)于其他致病菌也是最多的。

ELISA試驗(yàn)中應(yīng)當(dāng)注意以下事項(xiàng)：

用ELISA殘留物測(cè)定的視頻樣品十分廣泛，包括動(dòng)物體液（如乳汁）、各種動(dòng)物的肌肉組織和內(nèi)臟組織以及常見各類食品等均可經(jīng)過提取目標(biāo)物如；農(nóng)藥、獸藥、致病菌、病毒等的的抗體獲抗原成分進(jìn)行檢測(cè)。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定或使簡(jiǎn)單的離心、稀釋（如；牛奶）,有些則需經(jīng)過梨花方法提取（如；動(dòng)物組織和內(nèi)臟中的獸藥檢測(cè)。）檢測(cè)樣品應(yīng)保證新鮮，經(jīng)前處理的提取液應(yīng)及時(shí)進(jìn)行ELISA檢測(cè)，時(shí)間越長(zhǎng)，提取液中的抗原的小家越低，如不能及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)放4℃冰箱保存。應(yīng)盡量防止細(xì)菌污染，因菌體中可能有內(nèi)源性HRP，可能導(dǎo)致假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久，其中的HRP可發(fā)生聚合，在間接法ELISA檢測(cè)中可使本底加深，所以標(biāo)本如需保存做多次檢測(cè)，宜采用少量分裝冰箱保存，組織樣品若不及時(shí)做前期處理，應(yīng)放-15℃冰箱保存。

嚴(yán)格按實(shí)際和說明書的要求準(zhǔn)備試驗(yàn)中需要的試劑。ELISA檢測(cè)中應(yīng)采用蒸餾水或去離子水洗滌用水應(yīng)新鮮和高質(zhì)量。自配的緩沖液應(yīng)用PH計(jì)測(cè)量校正。從冰箱取出的實(shí)驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次實(shí)驗(yàn)不許用的部分及時(shí)放回冰箱保存。

在ELISA家養(yǎng)步驟中，應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的地步，避免加載孔壁尚不，病注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。加標(biāo)本一般用微量加樣器，按規(guī)定的量加入板孔中，每次加標(biāo)本應(yīng)跟換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染，加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量掇刀加液器，使加液過程迅速完成。

在視頻檢測(cè)中，檢測(cè)物抗原因分子量較小，一般采用競(jìng)爭(zhēng)法對(duì)抗員進(jìn)行檢測(cè)。在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即家標(biāo)本，抗體和加酶結(jié)合物后，ELISA屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面發(fā)生。以抗抗體包被為例，加入板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并非都有均等的和固相抗體結(jié)合的機(jī)會(huì)，只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸，這是一個(gè)逐步平衡的過程，需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。此乃ELISA反應(yīng)總是需要一定時(shí)間溫育之原因。

溫育常采用的是43、37℃、室溫和4℃等。37℃是試驗(yàn)中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法做反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)頂峰。為加速抗原抗體放映，可提高反應(yīng)溫度，有些實(shí)驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜采用更高的溫度。實(shí)際上，抗原抗體反應(yīng)在4℃條件下更為徹底，在放射免疫測(cè)定中多使抗原抗體反應(yīng)在冰箱中過夜，已形成最多的沉淀。但因所需時(shí)間太長(zhǎng)，在食品安全ELISA檢測(cè)中一般不予采用。

保溫的方式除有elisa儀器附有特制的電熱快外，一般采用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板應(yīng)貼著睡眠，使溫度徐蘇平衡。為避免蒸發(fā)，班上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時(shí)可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應(yīng)放在濕盒中。