蛋白質(zhì)的濃縮、干燥及保存

                                                                                           蛋白質(zhì)的濃縮、干燥及保存

1、樣品的濃縮

生物大分子在制備過程中猶豫過柱純化而樣品濃度變得很稀為了保存和檢定的目的，旺旺需要進(jìn)行濃縮。先介紹接種常用的濃縮技術(shù)。

（1）透析袋濃縮法：利用透析濃縮蛋白質(zhì)溶液時應(yīng)用最廣的一種。將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋（無透析袋可用玻璃紙代替），結(jié)扎，把高分子（6000-12000）聚合物如聚乙二醇（炭蠟）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可�？梢詫⑽�水劑配成30%-40%濃度的溶液，將裝有蛋白質(zhì)液的透析袋放入即可。吸水劑用過后，可放入溫箱中烘干或自然干燥后，認(rèn)可再用。

（2）冷凍干燥濃縮法：這是濃縮蛋白質(zhì)的一種較好的辦法，她即使蛋白質(zhì)不易變性，又可保持蛋白質(zhì)中固有的成分。他是將蛋白質(zhì)在冰凍狀態(tài)下直接升華去除水分。具體做法是將蛋白質(zhì)液在低溫下冰凍，然后移置于干燥器內(nèi)（干燥器內(nèi)裝有干燥劑，如NaOH,CaCL2和硅膠等）。密閉，迅速抽空，并維持再抽空狀態(tài)，數(shù)小時后即可獲得有大白紙的干燥粉末。干燥后的蛋白質(zhì)保存方便，應(yīng)用時可配成任意濃度使用，也可以采用凍干機進(jìn)行冷凍干燥

（3）吹干濃縮法：將蛋白質(zhì)溶液裝入透析袋內(nèi)，放在電風(fēng)扇下吹，次方法簡單，但速度慢，且溫度不能過高，最好不要超過15℃

（4）超濾膜濃縮法：此法是利用唯恐纖維素膜通過高壓將水分濾出，而蛋白質(zhì)存留于膜上達(dá)到濃縮目的，有兩種方法進(jìn)行濃縮：一種是用醋酸纖維素膜裝入高壓過濾器內(nèi)，在不斷攪拌之下過濾：另一種是將蛋白質(zhì)液裝入透析袋內(nèi)置于真空干燥器的通風(fēng)口上，負(fù)壓抽氣，而使袋內(nèi)液體滲出。

（5）凝膠濃縮法：選用孔徑較小的凝膠，如SephadexG25或G50將凝膠直接加入蛋白質(zhì)溶液中，根據(jù)趕腳的吸水量和蛋白質(zhì)濃縮需要濃縮的倍數(shù)而稱取所需的干膠量。放入冰箱內(nèi)，凝膠里自吸水后，通過離心除去

（6）濃縮膠濃縮法：濃縮膠是一種高分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的有機聚合物，具有很強的吸水性能。每克趕腳可吸水120-150ml他能吸收低分子量的物質(zhì)，如水，葡萄糖、蔗糖、無機鹽等，是和濃縮的分子量10000以上的生物大分子物質(zhì)。濃縮后，蛋白質(zhì)的會后率可達(dá)80-90%濃縮膠應(yīng)用方便，直接加入被濃縮的溶液中杰克，必須注意，濃縮溶液的PH值應(yīng)大于被濃縮物質(zhì)的等電點。否則在濃縮膠表面產(chǎn)生陽離子交換，影響濃縮物質(zhì)的回收率。ELISA試劑盒

2、干燥

為防止制備的生物大分子產(chǎn)品變質(zhì)，時期一語保存，常需要干燥處理。最常用的方法是真空冷凍干燥。真空冷凍干燥適用于不耐高溫，易于氧化物質(zhì)的干燥和保存，之歌裝置出寶庫奧干燥器，冷凝器及真空干燥外，同時增加了溫度因素在同壓力下，水蒸氣壓隨溫度下降而下降，故在低溫低壓下，冰很容易升華為氣體。操作時一般現(xiàn)將帶干燥的液體冷凍到冰點以下使之變成固體。然后在低溫低壓下將溶劑變成氣體而除去。此法干后的產(chǎn)品具有疏松，溶解度好，保持天然結(jié)構(gòu)等優(yōu)點，適用于各類生物大分子的干燥保存。

保存生物大分子的穩(wěn)定性與保存方法有很大關(guān)系。干燥的制品一般比較穩(wěn)定，在低溫情況下其活性可在數(shù)日甚至數(shù)年無明顯變化，貯存要求簡單，只要將干燥的樣品置于干燥器內(nèi)（內(nèi)裝有干燥劑）密封，保存于0-4℃冰箱即可。業(yè)態(tài)貯藏時應(yīng)注意以下幾點：1樣品不能太稀，必須濃縮到一定濃度才能封裝貯藏，樣品太稀易使生物大分子變性2一般需加入防腐劑和穩(wěn)定劑，常用的防腐劑有甲苯,苯甲酸,氯仿,百里酚等蛋白質(zhì)和酶常用的穩(wěn)定劑有硫酸銨蔗糖，甘油等此外鈣鋅硼酸等溶液對某些酶也有一定保護(hù)作用。核酸大分子一般保存在氯化鈉或檸檬酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中3貯藏溫度要求低，大多數(shù)在0℃左右冰箱保存，。有的則要求更低，應(yīng)視不同物質(zhì)而定。ELISA試劑盒