果糖-1,6-二磷酸（Fructose-1,6 Diphosphate，F(xiàn)DP）試劑盒說(shuō)明書(shū)

果糖-1,6-二磷酸(Fructose-1,6 Diphosphate，F(xiàn)DP)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法  100T/48S
測(cè)定意義
果糖 1,6-二磷酸是機(jī)體內(nèi)的高能代謝物和代謝調(diào)控劑，是糖解途的重要中間體，廣泛存
在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi)，能影響胞內(nèi)鉀離子的濃度，改善葡萄糖和其他能物的代謝，
促進(jìn)組氧的釋放，廣泛用于臨床醫(yī)藥制劑。
測(cè)定原理
醛縮催化果糖 1,6-二磷酸降解，產(chǎn)物與 DNPH縮合成紫紅色物質(zhì)，在540nm有特征吸收
峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、研缽、恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。
試劑組成和配制
試劑一：液體 105mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體 0.4mL×1支，4℃避光保存。
試劑三：液體 4mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體 16mL×1瓶，4℃保存。
樣品處理
1.組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g，加入1mL
試劑一），加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，12000rpm離心10min，取上清待測(cè)。
2.細(xì)胞：按照胞數(shù)（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500
萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔 7秒，
總時(shí)間3min）然后 4℃，12000rpm離心 10min，取上清待測(cè)。
3.液體：直接檢測(cè)。
測(cè)定操作
對(duì)照管測(cè)定管
樣品（µL）
試劑一（µL）
試劑二（µL）
20
40
4
44
充分混勻，37℃反應(yīng)30min
試劑三（µL）
試劑四µL
40
充分混勻，37℃溫育10min
160
40
160
充分混勻，于 37℃溫育 10min，于微石英比色皿/96孔板，蒸餾水
調(diào)零，測(cè)定 540nm處吸光值，記為 A對(duì)照管和  A測(cè)定管，△A=A
測(cè)定管-A對(duì)照管
計(jì)算公式
a.用微石英比色皿測(cè)定的算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.6971x+0.0012，R2=0.9983
1．按照質(zhì)量計(jì)算
FDP（mg/g）=(△A-0.0012)÷0.6971×V反總÷（W×V樣÷V樣總）
=18.94×(△A-0.0012)÷W
2．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
FDP（mg/104 cell）= (△A-0.0012) ÷0.6971×V反總÷（W×胞數(shù)÷V樣總）
=18.94×(△A-0.0012)÷細(xì)胞數(shù)
3．按照液體體積計(jì)算
FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.6971×V反總÷V樣
= 18.94×(△A-0.0012)
V反總：反應(yīng)總體積，0.264mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質(zhì)量，
g；V樣總：加入提取液體積，1mL
b.用96孔板測(cè)定的算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.3486x+0.0012，R2=0.9983
1．按照質(zhì)量計(jì)算
FDP（mg/g）= (△A-0.0012) ÷0.3486×V反總÷（W×V樣÷V樣總）
=37.88×(△A-0.0012)÷W
2．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
FDP（mg/104 cell）= (△A-0.0012) ÷0.3486×V反總÷（W×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）
= 37.88×(△A-0.0012)÷細(xì)胞數(shù)量
3．按照液體體算
FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.3486×V反總÷V樣
= 37.88×(△A-0.0012)
V反總：反應(yīng)總體積，0.264mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質(zhì)量，
g：V樣總：加入提取液體積，1mL
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