花色苷是一類易溶于極性溶劑的天然色素，屬黃酮類化合物。花色苷廣泛存在于植物的根、 莖、葉、花和果實(shí)中，使其呈現(xiàn)由紅到紫等不同顏色，是植物主要的呈色物質(zhì)。
測(cè)定原理：
采用 pH 示差法測(cè)定花色苷含量，當(dāng) pH 為 1.0 時(shí)花色苷在 530nm 處有最大吸收峰,而當(dāng) pH 為 4.5 時(shí),花色苷轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色查爾酮形式,在 530 處無吸收峰, 利用此特性分別測(cè)定在不同 pH 下的 530nm 和 700nm 處的吸光度值。pH 示差法減少了溶液 pH 和溶劑差異的影響，排除了 其他非花色苷類物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體 50 mL× 1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 50 mL× 1 瓶，4℃保存； 試劑二：液體 50 mL × 1 瓶，4℃保存；
花色苷的提取：
按照烘干樣品質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 烘干樣品， 加入 1mL 提取液），充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，提取液定容至 1 mL，蓋緊后 4℃浸提 24 h， 8000 g，常溫離心 10 min，取上清液待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上；試劑一和試劑二預(yù)熱 10min 以上。
2、取 100 µL 上清液和 900 µL 試劑一（相當(dāng)于稀釋 10 倍），靜置 15min，分別測(cè)定 530nm
和 700nm 處的吸光值，分別記為 A1 和 A2。
3、取 100 µL 上清液和 900 µL 試劑二（相當(dāng)于稀釋 10 倍），靜置 15min，分別測(cè)定 530nm
和 700nm 處的吸光值，分別記為 A3 和 A4。 4、計(jì)算△A=（A1-A2）-(A3-A4)
注意：如果A1大于1，可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)，保證總體積1mL不變，如50 µL上清液和950 µL試劑一（相當(dāng)于稀釋20倍）；如果A1小于0.1，可以適當(dāng)縮小稀釋倍數(shù)，保證總體積不變， 如200 µL上清液和800 µL試劑一（相當(dāng)于稀釋5倍），使A1保持在0.1~1范圍內(nèi)，可提高檢測(cè) 靈敏度；同樣調(diào)整上清液和試劑二體積比例；計(jì)算時(shí)以實(shí)際稀釋倍數(shù)代入下述公式中。
花色苷含量計(jì)算：
花色苷含量（µg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106]÷W=16.7×ΔA× F÷W V：提取液體積，1×10-3L，ε：花色苷的摩爾消光系數(shù)，2.69×104 L / mol /cm；d：比色皿光 徑，1cm；M：花色苷的相對(duì)分子質(zhì)量：449.2g/mol；F：稀釋倍數(shù)；106：1g=106µg；W：樣本干重：g。
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