山梨醇含量試劑盒說(shuō)明書(shū)

點(diǎn)擊次數(shù)：1405　日期：2016/4/26 9:14:23

分光光度法 50管/48樣

測(cè)定意義：

山梨醇廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是糖運(yùn)輸形式之一，而且與生物

抗逆性和食物風(fēng)味密切相關(guān)。因此，在糖代謝、抗逆性和食品研究中經(jīng)常需要檢測(cè)山梨醇含

量變化。

測(cè)定原理：

山梨醇在堿性溶液中與銅離子形成藍(lán)色絡(luò)合物，在655nm波長(zhǎng)有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。

山梨醇的提取：

按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.2g組織，加入2mL

蒸餾水），研磨成勻漿，置沸水浴中煮沸10分鐘（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，8000g，

常溫離心10min，取上清液待測(cè)。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至655nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表（在 EP管中依次加入下列試劑）：

試劑（μL）空白管測(cè)定管
試劑 150 150

試劑二 140 140

樣本 1000

蒸餾水 1000

混勻后室溫靜置15min，8000g，常溫離心10min，取上清液測(cè)655nm下吸光值A，計(jì)算ΔA=A

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山梨醇含量計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.352x - 0.002；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。

2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算

山梨醇含量（mg /g鮮重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷W

3、按照樣本蛋白濃度計(jì)算

山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷Cpr

V1：加入樣本體積，1mL；V2：加入提取液體積，2 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；

W：樣本質(zhì)量，g

原創(chuàng)作者：青島捷世康生物科技有限公司