影響ELISA實(shí)驗(yàn)的部分因素
目前，病毒性疾病的診斷主要依賴(lài)對(duì)其抗原或是抗體的檢測(cè)，國(guó)內(nèi)使用zui多的就是酶聯(lián)免疫吸附法實(shí)驗(yàn)，酶免實(shí)驗(yàn)靈敏度較高。但是如何保證結(jié)果的，結(jié)合實(shí)驗(yàn)人員實(shí)際操作，對(duì)影響酶免檢測(cè)結(jié)果的因素粗略的分析一下。
一 試劑盒的選擇
時(shí)機(jī)和質(zhì)量直接影響到結(jié)果的準(zhǔn)確性。目前國(guó)內(nèi)試劑盒與國(guó)外的質(zhì)量相差不大，94年起國(guó)家對(duì)體外診斷試劑統(tǒng)一實(shí)行批批檢測(cè)。我們的經(jīng)驗(yàn)是根據(jù)同行對(duì)試劑盒的使用滿意度，部分根據(jù)衛(wèi)生部檢測(cè)中心對(duì)參加室間質(zhì)評(píng)實(shí)驗(yàn)室的試劑盒使用情況綜合評(píng)價(jià)。
通常試劑盒的效期是根據(jù)酶結(jié)合物的穩(wěn)定性確定。這是試劑的核心組份，要防止反復(fù)的劇烈溫差變化，取用時(shí)的原則“即取即用”減少酶的失活，或者直接采購(gòu)小包裝的試劑盒。
二標(biāo)本
標(biāo)本質(zhì)量的好壞直接影響到結(jié)果的準(zhǔn)確性，目前實(shí)驗(yàn)室zui常用的標(biāo)本為血清。首先家養(yǎng)一定要在血塊完全收縮分離后進(jìn)行，否則纖維蛋白容易吸附孔底導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。溶血對(duì)酶免實(shí)驗(yàn)結(jié)果也會(huì)有較大影響。在標(biāo)本采集時(shí)用玻璃試管采集，有報(bào)道塑料試管存放，進(jìn)行乙肝兩對(duì)半檢測(cè)。結(jié)果4H后明顯偏低，這是因?yàn)榫垡蚁┯形娇乖蚩贵w蛋白，但是目前大多數(shù)的實(shí)驗(yàn)室免疫項(xiàng)目并非每天都做，比如乙肝兩對(duì)半抗HCV等。
三 加樣稀釋
我國(guó)大多數(shù)抗HCV等試驗(yàn)標(biāo)本只有10μl 10%的誤差。以2μl/L HBsAg質(zhì)控血清進(jìn)行試驗(yàn)，加量分別為50μl 45μl，其余條件一致，測(cè)定結(jié)果吸光度分別為0.405±0.026和0.288±0.047.因此，移液器的準(zhǔn)確性需要進(jìn)行校驗(yàn)。zui好使用進(jìn)口移液器，同時(shí)移液器，移液器要與吸頭連接緊密。
關(guān)于稀釋劑，媒介和物的家主，國(guó)內(nèi)也有部分使用滴瓶滴加，但是加液兩不夠準(zhǔn)確會(huì)造成稀釋倍數(shù)的差距。建議使用移液器加注。
四 育溫
通常在37度的水浴箱中完成，水浴箱的溫度指示為水的溫度，不過(guò)要值得注意的是不能將反應(yīng)板放在試管架上，要是反應(yīng)板飄浮在水面上稍高出試管架，箱蓋不能時(shí)常打開(kāi)，保持箱內(nèi)的溫度恒定，相反的情況容易假陽(yáng)性結(jié)果。
五洗版
zui好選擇手動(dòng)洗版，手工法洗版每洗一次在吸水紙上拍干一般都能保證洗版效果。
六顯色
國(guó)內(nèi)酶聯(lián)免疫試劑盒的色源底一般分為AB兩種液體。由于兩種液體不穩(wěn)定，使用保存不當(dāng)容易產(chǎn)生顏色，發(fā)現(xiàn)有顏色必須丟棄，顯色時(shí)加入A液后加B液。過(guò)程按照說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格執(zhí)行。否則隨著時(shí)間的延長(zhǎng)吸光度會(huì)下降出現(xiàn)假陽(yáng)性發(fā)生。
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